Khi mới lên sáu, Peter Parker đã mất cả cha lẫn mẹ trong một vụ tai nạn máy bay khủng khiếp. Từ đó anh chuyển về sống với chú Ben Parker và dì May Parker, tại Forest Hills, thành phố New York. Peter rất thông minh và đã là học viên danh dự của trường Trung học Midtown. Tuy nhiên tính cách hay ngượng ngùng và niềm đam mê với sách vở thường khiến anh lạc lõng với xã hội.

Trong khi tham gia một buổi triển lãm công cộng về cách xử lý an toàn vật liệu thừa của phòng thí nghiệm nguyên tử, được tài trợ bởi Hội đồng công nghệ, Peter đã bị một con nhện cắn (con nhện này trước đó lại bị chùm tia của máy gia tốc hạt nhân trong buổi trình diễn chiếu vào). Sau đó, trên đường về nhà, Peter phát hiện ra mình mới nhận được một sức mạnh mới và sự nhanh nhẹn phi thường, cũng như khả năng bám tường, thả tơ nhện (ở phim The Amazing Spider-Man anh tạo ra chiếc máy thả tơ nhện).. khiến anh ngay lập tức liên hệ với vết cắn của nhện.

Tình cờ Peter gặp một giải đấu trao thưởng một khoản tiền lớn cho ai có thể trụ được trên sàn đấu trong 3 phút với một võ sĩ đấu vật chuyên nghiệp, anh muốn nhân cơ hội này để thử nghiệm sức mạnh mới của mình. Mang một chiếc mặt nạ đề phòng những tình huống xấu hổ có thể xảy ra, nhưng Peter đã dễ dàng hạ gục đối thủ. Tự thiết kế một bộ trang phục với đôi găng tay chứa các cuộn tơ nhện, Peter chọn biệt danh cho mình là Người Nhện, anh ngay lập tức được khán giả quan tâm chú ý.

Khi bị oan ăn cắp tiền do đeo mặt nạ, Peter đã chạy trốn và gặp 1 tên cướp đang chạy trốn. Peter đã không chặn hắn vì vẫn cảm thấy bực bội do bị oan. Cho đến một tối, Peter trở về nhà và hay tin chú Ben đã bị giết. Biết được cảnh sát đã dồn được tên hung thủ vào một nhà kho, Peter dễ dàng tóm gọn hắn, rồi đau đớn nhận ra kẻ sát nhân kia lại chính là tên trộm mà anh đã bỏ qua dạo trước. Đau khổ và ân hận, Peter hiểu ra rằng có được sức mạnh mới đồng nghĩa với anh được giao cho những sứ mệnh tương xứng. Và kể từ đó, anh chính thức bước vào con đường trừ gian diệt bạo với vô số kẻ thù mang sức mạnh siêu việt.